测量钙与收缩力的最佳方法(3/3)—常见问题

测量钙与收缩力的最佳方法(3/3)

使用 Fura-2 测量细胞内钙以及原代心肌细胞和 iPSC-CM 收缩能力的最佳方法。

导言
精确评估心肌细胞中的钙处理和收缩力对于理解心脏生理和发病机制至关重要。要获得可靠的结果，必须正确制备样本并获取准确的数据。本应用说明介绍了利用 IonOptix 系统评估原代心肌细胞和 iPSC-CM 中钙处理和收缩性时，针对这两个方面建议的最佳技术。

常见问题

1. 是否有必要放弃钙离子比率为 0.8 或 1.2 的细胞？

由于不同细胞对刺激的反应可能不同，因此无需放弃钙离子比率出现轻微偏差的细胞。不过，在特定实验中保持一致的背景比率至关重要。

2.每次实验是否都需要进行本底荧光测量？

强烈建议每次实验都进行背景荧光测量，以保证采集信号的准确性，并确保数据的定量性。CytoSolver 和 IonWizard 软件都会从特定实验的所有荧光迹线中减去背景测量值。

3. 基线肌节长度可以作为排除标准吗？

当然，基线肌节长度可在实时或采集后用作排除标准。在采集过程中，最好避开肌节长度低于 1.7μm 的细胞。不过，如果实验已经完成，我们的分析软件IonWizard 和 CytoSolver 可以导出每个细胞的基线值，从而实现采集后的数据分类。请注意，某些治疗和基因处理会影响静息肌节长度。如果肌节长度可能使您的数据偏离合理结果，请勿将其作为排除标准。

4.Fura-2 荧光信号的最大可接受值是多少？

为了保持在 Fura-2 的线性范围内，通常建议分子和分母的原始值保持在 6000计数以下。每毫秒 6000 计数是用于检测荧光发射的光电倍增管的线性范围。

5. 如果 CytoSolver 3.0 拒绝接受某条轨迹并将其指定为 "峰值信噪比 "错误，该怎么办？

这意味着噪音和真实峰值之间的区别很小。通常情况下，如果细胞中的 Fura-2负载不足，或者细胞不够健康，无法对刺激做出适当反应，也不会出现明显的钙峰值，就会出现这种情况。

6. 死亡和健康的心肌细胞在形态上有哪些变化？